體外哺（bǔ）乳動物細胞染色體畸變試驗儀 文章

　

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體（tǐ）外哺乳動物細胞（bāo）染（rǎn）色體畸變試驗儀

 

 

一、 儀器介紹

實驗目的：

本（běn）試（shì）驗檢測受試物是（shì）否引（yǐn）起培養（yǎng）的哺乳動物細胞染（rǎn）色體畸變,以評價受試物致突（tū）變的可（kě）能性

實驗概述（shù）：

在加入和不加入代謝活化係統的條件下,使培養的哺乳（rǔ）動物細胞暴露（lù）於受試物中。用中期分裂相阻斷劑（jì）（如秋水仙素或秋水仙胺）處理,使細胞停止在中期分裂相,隨後收獲細胞,製片（piàn）,染色,分析染色體畸（jī）變。

大部分（fèn）的（de）致突變劑導致染色單（dān）體型畸變,偶有染色體型畸變發生。雖然多倍體的（de）增（zēng）加可能（néng）預示著有染色體數目畸變的（de）可能,但本方法並不適合用於測定染色體的數目畸變。

應用範圍

應用於科研、農業、衛生、教（jiāo）育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領（lǐng）域

符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農藥登記毒理學試驗方法第19部分:體外哺乳動物細胞染色體

畸變試（shì）驗（yàn）》

 

二、試驗流程

1）細胞培養

選擇合適細胞係，在（zài）含血清培養基（jī）中培養至對數生長期。

2）受試物處理

設置多個濃度組（需包（bāo）括細胞（bāo）毒性（xìng）評估，如50%生長抑製濃度）

陽性對照（如絲裂黴素C、環磷酰胺等已知誘（yòu）變劑）

陰性（xìng）對照（溶劑對照）

3.）代謝活化係（xì）統（S9混合液）

模擬體（tǐ）內代謝（xiè），用於檢測需代謝激活的致突變（biàn）物（wù）（如加Aroclor 1254誘導（dǎo）的大鼠肝S9）

4.）采樣時間

短期處理:1個（gè）細胞周期（通（tōng）常24小時，含（hán）或不含S9）

長期（qī）處理:覆蓋多個細胞周期（如（rú）48小時）

5）染色體製備

秋水仙素（或秋水（shuǐ）仙胺）處（chù）理:阻斷中期（qī）細胞。

低滲處理（KCI溶（róng）液）使細胞膨脹。

固定（甲醇:冰醋酸=3:1）後滴（dī）片，Giemsa染色。

6）鏡檢分（fèn）析（xī）

顯微鏡下（xià）觀察至少200個中期分裂相，記錄畸變類型和（hé）頻率。

 

 

三、儀器與試劑

關鍵儀器：

培養（yǎng）箱、生物（wù）安全櫃、離心機（jī）、顯微鏡（配備油鏡和圖像分析係統（tǒng））

染色體自動掃描儀（可（kě）選）

主要試劑:

細（xì）胞培養（yǎng）基、胎牛血清（qīng）、胰蛋白酶。

秋水仙（xiān）素、Giemsa染液、S9混合液。