體（tǐ）外（wài）哺乳動物細胞基因突變試驗儀

體（tǐ）外哺乳動（dòng）物細胞基因（yīn）突變（biàn）試驗儀

體外哺乳動物細胞基因（yīn）突變試驗儀

一、 儀器介（jiè）紹

實驗（yàn）目的：

本試驗用於檢測受試物對體外培養的哺乳動物細胞的基因突變作用,包括堿基對突變、移碼突變和缺失（shī）等,從而評價（jià）受試物引起突（tū）變的可能性

實驗概述：

本試驗屬正向突變試驗（yàn）,可檢出堿基置換（huàn）型致突變物和移碼型致（zhì）突變物。在加入和不加入代（dài）謝活化係統的條件下,使細胞暴露於受試物一定時間,然後將細胞傳代（dài）培養。胸苷（gān）激酶水平正常的細胞對三氟胸苷（gān）（trifluorothymidine,TFT）等敏感（gǎn）,因而在培（péi）養液中不能生長（zhǎng）分裂,突變細胞則不敏感,在含（hán）有三氟胸苷的選擇性培養液中能繼續分裂（liè）並形成集落。相似的,次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核（hé）糖基酶(HPRT)正常（cháng）的細（xì）胞（bāo）對 6-硫代鳥嘌呤（6-thioguanine,6-TG）敏感,突變的細胞則不敏感,在含有 6-硫代（dài）鳥嘌呤的選（xuǎn）擇性培養液中可生長形（xíng）成集落。基於突（tū）變集落數,計算突變頻率以評價受試物的（de）致突（tū）變性。

應用範圍

應用於科研（yán）、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆（kē）粒染毒效果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農藥登記毒理學試驗方法第（dì）20部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗》

二、試驗流（liú）程

1）細胞培養:

選擇合適細（xì）胞係（如L5178Y、CHO），常規傳代培養

2）受試物處理:

暴露於不同濃度受試物（需設陰性/陽性對照）

3）表達期:

預留足夠（gòu）時間（通常7-10天）使突變表（biǎo）型顯（xiǎn）現（xiàn）。

4.）突變體篩選（xuǎn）:

TK試驗:使用三氟胸苷（TFT）篩選TK突變體。

HPRT試驗:使用6-硫代鳥（niǎo）嘌呤（6-TG）選HPRT突變體。

5）克隆形成分析:

計數（shù）突變集落，計算突（tū）變頻率（突變集（jí）落數（shù）/存活細胞數）

6）數（shù）據統計:

與對照組（zǔ）比較，判斷突變率是否顯著（zhe）增加。

三（sān）、注意事項

1）細胞活力控製:受試（shì）物濃度需保（bǎo）證細胞（bāo）存活率（通常>50%）

2）代謝（xiè）活化係（xì）統（tǒng）:需加入S9混合物(模擬體內代謝，（如（rú）Aroclor 1254誘導（dǎo）的大鼠（shǔ）肝S9）。

3）假陽性/陰（yīn）性:避免pH、滲透壓等非特異性因素幹擾。

4）合規性:   遵循國際指南（如OECD 490、ICH S2R1）。

計算：

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