體內哺乳動(dòng)物骨髓細胞染色體畸變試驗儀
體內哺乳(rǔ)動物骨(gǔ)髓(suǐ)細(xì)胞染色體畸(jī)變試驗(yàn)儀
儀器介紹
實驗目的:
檢測受試物是(shì)否(fǒu)引起哺乳動物骨髓細胞染色體畸變,以評價受(shòu)試物致突變的可能性
實驗概述:
染(rǎn)色體是細胞核中具有特殊結構和遺傳功能的小體,當化學物質作用於細胞周期(qī)G1期和S期時誘發染色體型畸變,而作用於G2期時則誘發(fā)染色單體型畸變。給試驗的大、小鼠腹腔注入秋水仙素抑製細胞(bāo)分裂時紡(fǎng)錘絲的形成,以增加中(zhōng)期分裂相細胞的比例,並使染色體絲縮短、分散、輪廓清晰。在顯微鏡(jìng)下觀察染色體數目和(hé)形態。本方法特別適用於需考(kǎo)慮體內代謝活(huó)化後的染色體畸變分析。若(ruò)有證據表明(míng)受試物或其代(dài)謝產物不能到達骨髓,則不(bú)適用於本方法,
應用範圍
應用於科(kē)研、農業(yè)、衛生、教育、霧霾狀態可吸入(rù)顆粒染毒效果研究等各個領域(yù)
符合標準:
GB/T 15670.16-2017《農藥登記毒理學試(shì)驗方法第16部分:體內哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗》
二、試驗流(liú)程
1)動物選擇:常用齧(niè)齒類動物(大鼠或小鼠),通常每(měi)組至(zhì)少5隻/性別。
2)給藥方案:
單次給藥:通常在(zài)采樣前12-48小時給藥(覆蓋細(xì)胞周期)
多次給藥(yào):若受試物代謝或毒性需重複暴露。
3.陽性對(duì)照:已知致畸變劑(如環磷酰胺)
4.陰(yīn)性對(duì)照:溶劑對照(如生(shēng)理鹽水或DMSO)
5.采樣時間:通常(cháng)在給藥(yào)後24小時和(hé)48小(xiǎo)時采集骨髓細胞(bāo)(覆蓋不同細胞周(zhōu)期階段)
6.染色(sè)體製備:
處死(sǐ)動物後取出骨髓細胞。
用秋水仙素(Colchicine)處理,阻斷細胞分裂於中期。低滲處理、固定、製片並染色(如Giemsa染色)
7.鏡檢分(fèn)析:
觀察至少200個中期分裂相/動物,記錄畸變(biàn)類型和頻率,
區分染色體型畸(jī)變(如(rú)雙著絲粒體)和染色單體型(xíng)畸變(如(rú)斷裂)
三、結果判定(dìng)
1)劑量相關性:畸變率(lǜ)隨劑量增加而(ér)升高。
2)統計學差異:試驗組畸變率顯著高於陰性對照組(如p<0.05)
3)生物學意義:需結(jié)合曆史對照數據(jù)和(hé)畸變(biàn)類型綜合評估。