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體外（wài）哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀
一、 儀器介紹
實（shí）驗目的：
本試驗檢測受試物是否引（yǐn）起培養的哺乳動物細胞染色體畸變,以（yǐ）評價受試（shì）物致突變的可能性
實驗概述：
在加入和不加入代謝活化係統的條件下,使培（péi）養的哺乳動物細胞暴露於受試物（wù）中。用中期分裂相（xiàng）阻斷劑（如秋水仙素或秋（qiū）水仙胺）處理（lǐ）,使細胞（bāo）停止在中期分裂相,隨後收獲（huò）細胞,製片,染色,分析染色體畸變。
大部分的致突變劑導（dǎo）致染色單體型（xíng）畸變,偶有染色體型畸變發生。雖然多倍體的增加可能預示著有染色體數目畸變的可能（néng）,但本方法並不適（shì）合（hé）用於測定染色體的數目畸變。
應用範圍
應用於科研、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個（gè）領域
符合標準：
GB/T 15670.19-2017《農藥登記（jì）毒理學試驗方法第19部分:體外哺乳（rǔ）動物細胞染（rǎn）色體（tǐ）
畸變試（shì）驗》
二、試驗（yàn）流程
1）細胞培養（yǎng）
選擇合適細胞係，在（zài）含血清培養基中培養至對數生長期。
2）受試物處理
設置多（duō）個濃度（dù）組（需包括細胞毒性評估，如50%生長抑製濃度）
陽性（xìng）對照（如絲裂黴素C、環磷酰胺等已知誘變劑）
陰性對照（溶劑對照）
3.）代謝活化係統（S9混合液）
模擬（nǐ）體內代謝，用於檢測需代謝激活的致突變物（如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）
4.）采樣時間
短期處（chù）理:1個細胞周期（通常24小時，含或不含S9）
長期處理:覆蓋多個細胞周（zhōu）期（如48小時）
5）染（rǎn）色（sè）體（tǐ）製備（bèi）
秋水仙素（或秋水仙胺（àn））處理:阻斷中期細胞。
低滲處理（KCI溶液）使細胞膨脹。
固（gù）定（甲醇:冰醋酸=3:1）後滴片，Giemsa染色。
6）鏡（jìng）檢分析
顯微鏡下（xià）觀察（chá）至少200個（gè）中期分裂相，記錄畸變（biàn）類型和頻率（lǜ）。
三、儀器與試劑
關鍵儀器：
培養箱、生物安全櫃、離心機、顯微鏡（配備油鏡和圖（tú）像分析（xī）係統）
染色體自動掃（sǎo）描儀（可選）
主要試（shì）劑:
細胞培養基、胎（tāi）牛血清、胰蛋白酶。
秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液（yè）。